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牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)
物品單位 價格 品牌
1380 上海滬崢
  • 產地╃↟:國內
  • 貨號╃↟:HXG548
  • 釋出日期╃↟: 2021-02-26
  • 更新日期╃↟: 2022-06-07
產品詳細說明
產地 國內
品牌 上海滬崢
貨號 HXG548
用途範圍 僅限科研
純度 詳詢客服%
CAS編號
規格 50T/盒
是否進口

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)為滬崢生物主要產品✘•·,滬崢生物堅守品質·✘▩、銳意進取✘•·,滿足於每一位老師的實驗要求✘•·,廠家供貨✘•·,品質保證✘•·,價格優惠,歡迎來電諮詢│•!

規格╃↟:50T/盒

本試劑盒用牛腺病毒3型(BAV-3)特異性引物✘•·,結合一條特異性探針✘•·,用熒光PCR技術對牛腺病毒3型(BAV-3)進行體外擴增檢測✘•·,用於對可疑感染者的病原學診斷·│₪☁•。

【儲存條件及有效期】


-20℃避光儲存·✘▩、運輸·✘▩、避免反覆凍融✘•·,有效期12個月·│₪☁•。

【適用儀器】

ABI系列·✘▩、MJ系列·✘▩、Roche系列·✘▩、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀·│₪☁•。
【儲存和運輸】

牛腺病毒3型(BAV-3)試劑盒(熒光-PCR法)樣品處理(樣本處理區)

1. 樣本前處理

組織樣品╃↟:每份組織分別從 3 個不同的位置稱取樣品約 1g✘•·,手術剪剪碎混勻後 0.5g 於研磨器中研磨✘•·,加入 1.5mL 生理鹽水後繼續研磨✘•·,待勻漿後轉至 1.5mL 滅菌離心管中✘•·,8000rpm 離心 2min✘•·,取上清液 100μL 1.5mL 滅菌離心管中

1.2 DNA 提取

1) DNA 的提取也可以採用 DNA 提取試劑盒(離心柱提取法)✘•·,請嚴格按照試劑盒說明書進行操作·│₪☁•。

2. 試劑配製(試劑準備區)

根據待檢測樣本總數✘•·,設所需要的 PCR 反應管管數為N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份✘•·,多配製 1 份)✘•·,每測試反應體系配製如下表╃↟:

試劑

APP 反應液

酶液

用量(樣本數為 N)

20μL

1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中✘•·,21uL/管·│₪☁•。

3. 加樣(樣本處理區)

將步驟 1 提取的 DNA·✘▩、陽性質控品·✘▩、陰性質控品各取 4μL✘•·,分別加入相應的反應管中✘•·,蓋好管蓋✘•·,混勻✘•·,短暫離心·│₪☁•。

4. PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1 將待檢測反應管置於熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2 設定好通道·✘▩、樣品資訊✘•·,反應體系設定為 25μL;

熒光通道選擇╃↟: 檢測通道(Reporter Dye)FAM✘•·, 淬滅通道(Quencher Dye) NONE✘•·,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光✘•·,選擇 None 即可·│₪☁•。

4.3 推薦迴圈引數設定╃↟:

步驟

迴圈數

溫度

時間

收集熒光訊號

1

1 cycle

95℃

10min

2

40 cycles

94℃

15sec

55℃

30sec

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設定 Baseline Threshold╃↟:一般直接按機器自動分析的結果分析✘•·,當曲線出現整體傾斜時✘•·,根據分析後圖像調節Baseline start (一般可在 3~15 範圍內調)·✘▩、stop (一般可在 5~20 範圍內調節)✘•·,以及 Threshold Value 值(上下拖動閾值線至高於陰性對照)✘•·,重新分析結果·│₪☁•。

5.2 結果判斷

陽性╃↟:檢測通道 Ct 值≤35✘•·,且曲線有明顯的指數增長曲線;

可疑╃↟:檢測通道 35≤38✘•·,建議重複檢測✘•·,如果檢測通道仍為 35≤38✘•·, 且曲線有明顯的增長曲線✘•·,判定為陽性✘•·,否則為陰性;

陰性╃↟:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值·│₪☁•。

6. 質控標準

陰性質控品╃↟:Ct 值>38 或無 Ct 值;

陽性質控品╃↟:擴增曲線有明顯指數生長期✘•·,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足✘•·,否則實驗視為無效·│₪☁•。

7. 檢測方法的侷限性

? 樣本檢測結果與樣本收集·✘▩、處理·✘▩、運送以及儲存質量有關;

? 樣本提取過程中沒有控制好交叉汙染✘•·,會出現假陽性結果;

? 陽性對照·✘▩、擴增產物洩漏✘•·,會導致假陽性結果;

? 病原體在流行過程中基因突變·✘▩、重組✘•·,會導致假陰性結果;

? 不同的提取方法存在提取效率差異✘•·,會導致假陰性結果;

? 試劑運輸✘•·,儲存不當或試劑配製不準確引起的試劑檢測效能下降✘•·,出現假陰性或定 量檢測不準確的結果;

? 本檢測結果僅供參考✘•·,如須確診請結合臨床症狀以及其他檢測手段·│₪☁•。

【注意事項】

? 所有操作嚴格按照說明書進行;

? 試劑盒內各種組分使用前應自然融化✘•·,完全混勻並短暫離心;

? 反應液應避光儲存;

? 反應中儘量避免氣泡存在✘•·,管蓋需蓋緊;

? 使用一次性吸頭·✘▩、一次性手套和各區專用工作服;

? 樣本處理·✘▩、試劑配製·✘▩、加樣需在不同區進行✘•·,以免交叉汙染;

? 實驗完畢後用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

? 試劑盒裡所有物品應視為汙染物對待✘•·,並按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通 則》進行處理·│₪☁•。




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