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Western Blot所用試劑彙總

釋出時間◕↟☁: 2020-06-24   

主要試劑 
1₪◕·₪、 丙烯醯胺和N₪╃▩₪·,N’-亞甲雙丙烯醯胺₪╃▩₪·,應以溫熱(以利於溶解雙丙稀醯胺)的去離子水配製含有29%
(w/v)丙稀醯胺和1%(w/v)N₪╃▩₪·,N’-亞甲雙丙烯醯胺儲存液丙稀醯胺29g₪╃▩₪·,N₪╃▩₪·,N-亞甲叉雙丙稀醯胺1g₪╃▩₪·,加H2O至100ml☁☁·▩。)儲於棕色瓶₪╃▩₪·,4℃避光儲存☁☁·▩。嚴格核實PH不得超過7.0₪╃▩₪·,因可以發生脫氨基反應是光催化或鹼催化的☁☁·▩。使用期不得超過兩個月₪╃▩₪·,隔幾個月須重新配製☁☁·▩。如有沉澱₪╃▩₪·,可以過濾☁☁·▩。 
2₪◕·₪、 十二烷基硫酸鈉SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS₪╃▩₪·,1mlH2O去離子水配製₪╃▩₪·,室溫儲存☁☁·▩。 
3₪◕·₪、 分離膠緩衝液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris和48ml1mol/LHCL混合₪╃▩₪·,加水稀釋到100ml終體
積☁☁·▩。過濾後40C儲存☁☁·▩。 
4₪◕·₪、 濃縮膠緩衝液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶於40mlH2O中₪╃▩₪·,用約48ml 1mol/L HCL調至
pH6.8加水稀釋到100ml終體積☁☁·▩。過濾後40C儲存☁☁·▩。這兩種緩衝液必須使用Tris鹼製備₪╃▩₪·,再用HCL調節PH值₪╃▩₪·,而不用Tris.CL☁☁·▩。 
5₪◕·₪、 TEMED原溶液N₪╃▩₪·,N₪╃▩₪·,N’N’四甲基乙二胺催化過硫酸銨形成自由基而加速兩種丙稀醯胺的聚合☁☁·▩。PH太
低時₪╃▩₪·,聚合反應受到抑制☁☁·▩。10%(w/v)過硫酸胺溶液☁☁·▩。提供兩種丙稀醯胺聚合所必須的自由基☁☁·▩。去離子水配制數ml₪╃▩₪·,臨用前配製. 
6₪◕·₪、 SDS-PAGE加樣緩衝液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩衝液8ml₪╃▩₪·,甘油6.4ml₪╃▩₪·,10%SDS 12.8ml₪╃▩₪·,巰基乙醇3.2ml
₪╃▩₪·,0.05%溴酚藍1.6ml₪╃▩₪·,H2O 32ml混勻備用☁☁·▩。按1:1或1:2比例與蛋白質樣品混合₪╃▩₪·,在沸水終煮3min混勻後再上樣₪╃▩₪·,一般為20-25ul₪╃▩₪·,總蛋白量100μg☁☁·▩。 
7₪◕·₪、 Tris-甘氨酸電泳緩衝液:30.3gTris₪╃▩₪·,188g甘氨酸₪╃▩₪·,10gSDS₪╃▩₪·,用蒸餾水溶解至1000ml₪╃▩₪·,得0.25mol/L 
Tris-1.92mol/L甘氨酸電極緩衝液☁☁·▩。臨用前稀釋10倍☁☁·▩。 
8₪◕·₪、 轉移緩衝液◕↟☁:配製1L轉移緩衝液₪╃▩₪·,需稱取2.9g甘氨酸₪◕·₪、5.8gTris鹼₪◕·₪、0.37g SDS₪╃▩₪·,並加入200ml甲醇₪╃▩₪·,
加水至總量1L☁☁·▩。 
9₪◕·₪、 麗春紅染液儲存液◕↟☁:麗春紅S 2g 三氯乙酸30g 磺基水楊酸 30g 加水至100ml 用時上述儲存液稀釋10
倍即成麗春紅S使用液☁☁·▩。使用後應予以廢棄☁☁·▩。 
10₪◕·₪、 脫脂奶粉5%(w/v)☁☁·▩。 
11₪◕·₪、 NaN3 0.02% 疊氮鈉(有毒₪╃▩₪·,戴手套操作)₪╃▩₪·,溶於磷酸緩衝鹽溶液(PBS)☁☁·▩。 
12₪◕·₪、 Tris緩衝鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5)₪╃▩₪·,500mmol/LnaCl☁☁·▩。 
13₪◕·₪、 Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1☁☁·▩。 
14₪◕·₪、 過氧化物酶標記的第二抗體☁☁·▩。 
15₪◕·₪、 NBT(溶於70%二甲基甲醯胺₪╃▩₪·,75mg/ml)☁☁·▩。 
16₪◕·₪、 BCIP(溶於100%二甲基甲醯胺₪╃▩₪·,50mg/ml)☁☁·▩。 
17₪◕·₪、 100mmol/LTris-HCL(pH9.5)☁☁·▩。 
18₪◕·₪、 100mmol/L NaCl☁☁·▩。 
19₪◕·₪、 50mmol/LTris-HCL(pH7.5)₪╃▩₪·,5mmol/L EDTA☁☁·▩。
20₪◕·₪、 ECL發光液

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